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                    产品中心 > 微量样本直接扩增系列 > FS Mix Direct for tissue(P2071b-P2072b)

                    FS Mix Direct for tissue(P2071b-P2072b)

                    促销: 260.00~1144.00

                    分享

                    运费 ¥0.00
                    P2071b(1ml(40次,50ul体系/次)) P2072b(1ml*5(200次,50ul体系/次))

                    FS? Mix Direct for Tissue

                    Cat. #P2071b,P2072b

                    产品简介

                    FS? Mix Direct for Tissue是适合组织样本扩增的浓缩快速高效PCR预混合溶液,含有FS? Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入简单处理后的样本处理液和引物即可进行PCR,从而可以极大地简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。FS? Mix Direct for Tissue的反应体系经过优化处理,高灵敏度的FS? Taq DNA聚合酶确保处理液中的微量样本得到高效扩增。本产品不用进行繁琐的DNA提取,最大限度减少实验误差和交叉污染;同时依靠特殊的缓冲体系增强PCR扩增的特异性,保证扩增效果与DNA模板扩增效果同样可靠。

                    FS? Taq DNA聚合酶是根据蛋白工程原理,以Taq DNA聚合酶为基础,研发设计的新一代DNA聚合酶。本产品具有类似KOD酶的快速扩增能力,延伸速度为20s/kb70~75℃,简单模板可达5s/kb)。是普通Taq DNA聚合酶的3倍,可缩短一半以上的扩增时间;同时具备Taq DNA聚合酶扩增效率高、适应性广等优点。FS? Taq DNA聚合酶使用方法与普通Taq DNA聚合酶基本相同,只需注意适当缩短延伸时间。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA突出端,可直接用于TA克隆。

                    产品组成

                    Component

                    P2071b

                    P2072b

                    2× FS? Mix   Direct for Tissue

                    1 ml

                    1 ml× 5

                    超纯水

                    1 ml

                    1 ml× 5

                    Neutralization    Solution  

                    1 ml

                    5 ml

                    Extraction    Solution    

                    10   ml

                    40   ml

                    本产品分体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

                    保存条件

                    -20℃保存2年。

                    质量控制

                    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                    功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

                    应用举例

                    1. 处理样品

                    组织:3-5mg组织置于1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5,000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

                    头发:取两根带毛囊的头发,剪下带毛囊的发根放入1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

                    口腔拭子:取样前30min内请勿进食及饮水,使用无菌棉签在口腔内擦拭10次。将棉球剪下置于1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction  Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5,000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

                    培养细胞:如果是悬浮培养细胞直接取1×103-104当量的细胞加入到50 μl PCR反应体系中即可。如果是贴壁培养细胞,取3-5mg细胞组织置于1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5,000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

                    血液、淋巴液DNA病毒:100 μl血清或淋巴液至1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization  Solution,充分涡旋振荡,12,000rpm离心10min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

                    2. 配制反应体系

                    请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

                    Ordinal

                    Component

                    Volume

                    (50 μl reaction volume)

                    Final   concentration

                    (50 μl reaction volume)

                    1

                    2× FS? Mix   Direct for Tissue

                    25   μl

                    2

                    upstream   primer (10 μM)[1]

                    2 μl

                    0.4   μM

                    3

                    downstream   primer (10 μM)[1]

                    2 μl

                    0.4   μM

                    4

                    处理液上清

                    0.5-2   μl

                    <1μg

                    5

                    超纯水[2]

                    To 50   μl

                    -

                    optional

                    MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[3]

                    Variable

                    -

                    [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

                    [2] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

                    [3] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

                    3. 设定反应程序进行PCR反应

                    大多数模板的快速扩增条件:

                    Stage  

                    Temperature

                    Time

                    Number   of Cycles

                    Initial   Denaturation

                    94℃

                    3   min

                    1

                    Denaturation

                    94℃

                    30   sec

                    28-40  

                    Annealing

                    55-68℃[1]

                    30   sec

                    Extension

                    72℃

                    Variable[2]

                    Final   Extension

                    72℃

                    2   min

                    1

                    [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

                    [2] 延伸时间按20 sec/kb来设最佳。

                    1kb简单模板的快速扩增条件:

                    由于1kb简单模板的二级结构简单,且长度较短,可同时缩短变性、退火时间至15s,延伸时间20s,以实现快速扩增。

                    4. 分析结果

                    反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

                    操作注意事项

                    处理的组织样本往往不会完全溶解,这是正常现象。溶解在处理液中的组织样本足够满足FS? Mix Direct for Tissue扩增的需要。

                    室温下FS? Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板DNA。

                    延伸时间视片段长度而定。一般情况,≤500bp目的片段延伸15s,500bp-1kb延伸20s,>1kb延伸时间按20s/kb计算。

                    FS? Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3’末端通?;峒由弦桓龆嘤嗟耐蜒跸汆堰屎塑?,可进行TA克隆。

                    FS? Mix Direct for Tissue也可采用常规程序扩增。

                    引物设计注意事项

                    引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

                    相关产品

                    名称

                    货号

                    规格

                    PCR Mix

                    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    Power Green qPCR Mix

                    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    1kb ladder

                    M1181/M1182

                    50/250

                    DSTM5000

                    M1111/M1112

                    60/300

                    高纯度质粒小提试剂盒

                    N1011/N1012/N1013

                    50/100/200

                    通用RNA提取试剂盒

                    R1051

                    50

                    基因组DNA快速提取试剂盒

                    N1111/N1112

                    50/100

                    DNA凝胶回收试剂盒

                    N1071/N1072/N1073

                    50/100/200

                    RT-PCR Kit

                    R1011/R1012

                    20/100

                    更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。


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