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                    产品中心 > 嗜热DNA聚合酶 > HS? Taq DNA聚合酶(P1081-P1082-P1083-P1084)

                    HS? Taq DNA聚合酶(P1081-P1082-P1083-P1084)

                    促销: 104.00~5200.00

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                    P1081(250U) P1082(500U) P1083(1000U) P1084(18000U)

                     HS? Taq DNA聚合酶

                    Cat. #P1081,P1082,P1083,P1084

                    产品简介

                    HS? Taq DNA聚合酶(高特异性Taq DNA聚合酶)是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高,易产生非特异性条带的情况,专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良,使得引物与模板的特异性结合力显著增强,从而提高引物与模板结合的严谨性,减少非特异性扩增。实验数据证明HS? Taq DNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性,降低背景,又能对长片段有较高的扩增效率。延伸速度为1min/kb70~75℃,简单模板可达10s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA,可直接用于TA克隆。

                    产品组成

                    Component

                    P1081

                    250U

                    P1082

                    500U

                    P1083

                    1,000U

                    P1084

                    18,000U

                    HS? Taq DNA聚合酶(5U/μl[1]

                    50 μl

                    100 μl

                    200 μl

                    100 μl × 36

                    HS? Taq DNA聚合酶(2.5U/μl[1]

                    100 μl

                    200 μl

                    400 μl

                    200 μl × 36

                    10× HS? PCR BufferMg2+ Plus[2]

                    1.25 ml

                    1.25 ml

                    1.25 ml × 2

                    1.25 ml × 36

                    6× Loading Buffer[3]

                    1 ml

                    1 ml

                    1 ml

                    -

                    [1] HS? Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl5 U/μl两种包装,可自由选择,如没特别说明提供5 U/μl的包装。

                    [2] 10× HS? PCR Buffer分为Mg2+ PlusMg2+ Free两种包装,可方便选择。如无特别说明提供Mg2+ Plus缓冲液。Mg2+ Free10× HS? PCR Buffer提供25 mM MgCl2。

                    [3] P1084不包含6× Loading Buffer,如有需要请单独购买(Cat. #M9041)。

                    本产品不含dNTPs,如有需要请单独购买(Cat. #P9011/P9012/P9013)。

                    活性定义

                    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

                    保存条件

                    -20℃保存2年。

                    质量控制

                    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                    功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

                    应用举例

                    1. 配制反应体系

                    请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

                    Ordinal

                    Component

                    Volume

                    (50 μl reaction volume)

                    Final   concentration

                    (50 μl reaction volume)

                    1

                    10× HS? PCR BufferMg2+ Plus

                    5 μl

                    2

                    dNTPs2.5mM

                    4 μl

                    0.4 mM

                    3

                    upstream primer (10 μM)[1]

                    2 μl

                    0.4 μM

                    4

                    downstream primer (10 μM)[1]

                    2 μl

                    0.4 μM

                    5

                    HS? Taq DNA聚合酶(5U/μl[2]

                    0.5 μl

                    2.5U

                    6

                    template DNA[3]

                    1-4 μl

                    <1μg

                    7

                    超纯水[4]

                    To 50 μl

                    -

                    optional

                    MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]

                    Variable

                    -

                    [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

                    [2] 根据目的片段扩增的难易程度调整DNA聚合酶的用量。

                    [3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

                    Template

                    Dosage

                    人类基因组DNA

                    0.1μg-1μg

                    λDNA

                    0.5ng-5ng

                    大肠杆菌基因组DNA

                    10ng-100ng

                    质粒DNA

                    0.1ng-10ng

                    [4] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

                    [5] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

                    2. 设定反应程序进行PCR反应

                    Stage

                    Temperature

                    Time

                    Number of Cycles

                    Initial Denaturation

                    94℃

                    3 min

                    1

                    Denaturation

                    94℃

                    30 sec

                    25-35

                    Annealing

                    55-68℃[1]

                    30 sec

                    Extension

                    72℃

                    Variable[2]

                    Final Extension

                    72℃

                    5-10 min

                    1

                    [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

                    [2] 延伸时间按1min/kb来设最佳(简单模板可达10s/kb)。。

                    3. 分析结果

                    将产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

                    无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

                    操作注意事项

                    1 室温下HS? Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加HS? Taq DNA聚合酶或模板DNA。

                    2 HS? DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通?;峒由?/span>1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。也可以使用HS? DNA聚合酶进行加A反应。

                    3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HS? Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。

                    引物设计注意事项

                    引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

                    相关产品

                    名称

                    货号

                    规格

                    PCR Mix

                    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    Power Green qPCR Mix

                    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    1kb ladder

                    M1181/M1182

                    50/250

                    DSTM5000

                    M1111/M1112

                    60/300

                    高纯度质粒小提试剂盒

                    N1011/N1012/N1013

                    50/100/200

                    通用RNA提取试剂盒

                    R1051

                    50

                    基因组DNA快速提取试剂盒

                    N1111/N1112

                    50/100

                    DNA凝胶回收试剂盒

                    N1071/N1072/N1073

                    50/100/200

                    RT-PCR Kit

                    R1011/R1012

                    20/100

                    更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

                     

                     


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