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                    产品中心 > 常规PCR Mix系列 > Long Taq Mix(P2061-P2062)

                    Long Taq Mix(P2061-P2062)

                    促销: 260.00~663.00

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                    运费 ¥0.00
                    P2061(1 ml(40次,50 μl体系/次)) P2062(1 ml*3(120次,50 μl体系/次))

                    Long Taq Mix

                    Cat. #P2061,P2062

                    产品简介

                    Long Taq Mix浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。同时,由于体系内含有优化剂与增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。

                    Long Taq DNA聚合酶是专门用于扩增长片段的嗜热DNA聚合酶,其保真性是普通Taq DNA聚合酶的3倍左右。扩增片段的长度可达20 kb(简单模板)。在扩增复杂模板(如GC-rich或重复序列)时,Long Taq DNA聚合酶的扩增效率显著高于Taq DNA聚合酶。因此Long Taq DNA聚合酶适合>5kbDNA片段及复杂模板的扩增。延伸速度为20s/kb70~75℃,简单模板可达5s/kb)。扩增产物具有两种末端:平末端与3'-dA。

                    产品组成

                    Component

                    P2061

                    P2062

                    2× Long Taq Mix

                    1 ml

                    1 ml× 3

                    超纯水

                    1 ml

                    1 ml× 3

                    PCR   Enhancer[1]

                    0.5 ml

                    0.5 ml× 3

                    本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

                    [1] PCR Enhancer主要通过降低DNA模板的解链温度,促进DNA模板的有效扩增,增加PCR反应的灵敏度和特异性??傻ザ蓝┕海?/span>Cat. #P9041)。

                    保存条件

                    -20℃保存2年。

                    质量控制

                    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                    功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

                    应用举例

                    1. 配制反应体系

                    请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

                    Ordinal

                    Component

                    Volume

                    (50 μl reaction volume)

                    Final   concentration

                    (50 μl reaction volume)

                    optional

                    PCR Enhancer

                    4-16 μl

                    -

                    1

                    2×Long Taq Mix

                    25   μl

                    2

                    upstream   primer (10 μM)[1]

                    2 μl

                    0.4   μM

                    3

                    downstream   primer (10 μM)[1]

                    2 μl

                    0.4   μM

                    4

                    template   DNA[2]

                    1-4   μl

                    <1μg

                    5

                    超纯水[3]

                    To   50 μl

                    -

                    optional

                    MgCl2(MgSO4)[4]

                    Variable

                    -

                    [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

                    [2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

                    Template

                    人类基因组DNA

                    λDNA

                    大肠杆菌基因组DNA

                    质粒DNA

                    Dosage

                    0.1μg-1μg

                    0.5ng-5ng

                    10ng-100ng

                    0.1ng-10ng

                    [3] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

                    [4] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)。

                    2. 设定反应程序进行PCR反应

                    Stage  

                    Temperature

                    Time

                    Number   of Cycles

                    Initial   Denaturation

                    94℃

                    3   min

                    1

                    Denaturation

                    94℃

                    30   sec

                    25-35  

                    Annealing

                    55-68℃[1]

                    30   sec

                    Extension

                    72℃

                    Variable[2]

                    Final   Extension

                    72℃

                    5-10   min

                    1

                    [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

                    [2] 延伸时间按20s/kb来设最佳(简单模板可达5s/kb)。

                    3. 分析结果

                    反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

                    无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1:;10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

                    操作注意事项

                    1 室温下Long Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板DNA。

                    2 Long Taq Mix的扩增产物有两种末端:平末端和3'-dA突出末端。如要进行TA克隆,请先进行加A反应,以提高克隆效率。(加A反应:参考如下体系,72℃,15-30min

                    PCR(纯化)产物

                    1-7   μl

                    10×   Taq BufferMg2+ Plus

                    1   μl

                    dATP  

                    0.2   mM

                    Taq   DNA聚合酶

                    5U

                    超纯水

                    To   10 μl

                    3 Long Taq Mix既可扩增长片段的DNA,也可扩增小片段(几百bp)的DNA。

                    4 PCR Enhancer主要在Long Taq Mix扩增无结果或扩增效果不好时使用。使用后退火温度需在原温度上降低2-3℃,否则会降低PCR效率,建议使用Tm值较高的引物。PCR Enhancer能够与所有的耐热DNA聚合酶共同作用。

                    引物设计注意事项

                    引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

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                    名称

                    货号

                    规格

                    PCR Mix

                    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    Pfu Mix

                    P2021/P2022

                    1ml/5ml

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                    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    1kb ladder

                    M1181/M1182

                    50/250

                    DSTM5000

                    M1111/M1112

                    60/300

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                    N1011/N1012/N1013

                    50/100/200

                    通用RNA提取试剂盒

                    R1051

                    50

                    基因组DNA快速提取试剂盒

                    N1111/N1112

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                    50/100/200

                    RT-PCR Kit

                    R1011/R1012

                    20/100

                    更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

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