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                    产品中心 > DNA产物纯化系列 > 大片段DNA凝胶回收试剂盒(N1074-N1075-N1076)

                    大片段DNA凝胶回收试剂盒(N1074-N1075-N1076)

                    促销: 364.00~1118.00

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                    N1074(50次) N1075(100次) N1076(200次)

                    大片段DNA凝胶回收试剂盒

                    产品组分

                    货号

                    N1074

                    50次)

                    N1075

                    100次)

                    N1076

                    200次)

                    溶液BD

                    45ml

                    90 ml

                    90 ml×2

                    溶液PE

                    15 ml

                    15 ml×2

                    20 ml×3

                    溶液Eluent

                    2.5 ml

                    5 ml

                    10 ml

                    DNA纯化柱

                    50

                    100

                    200

                    说明书

                    1

                    1

                    1


                    溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

                    溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

                    上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

                    产品说明

                    本产品采用了经典的硅胶膜技术,用于从琼脂糖凝胶中回收大片段DNA5-40 kb)。其纯化原理是含有目的片段的琼脂糖凝胶溶解后,硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA片段(高盐、低pH值),蛋白及其它杂质不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度DNA片段,此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

                     

                    质量控制

                    1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp、1,000 bp、10,000 bpDNA片段。

                     

                    保存条件

                    室温保存2年。

                    注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                     

                    溶液PE第一次使用前请按瓶上标签加入4倍体积的无水乙醇,即15 ml溶液PE中加入60 ml无水乙醇,20 ml溶液PE中加入80 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

                    本产品对电泳使用的琼脂糖种类没有严格限制。为了保证回收DNA的质量和回收效率,尽量使用高纯度的琼脂糖。

                    电泳时请使用新鲜配制的TAE电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。TBE电泳缓冲液中的硼酸与琼脂糖相互作用生成的复合物会影响DNA的回收效率,因此TBE凝胶电泳不适合用于DNA回收。

                    请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。

                    为提高DNA回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。

                    本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。但如果DNA浓度小,或DNA初始量少,回收率将会偏低。

                    溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

                    为了保证回收效率,请不要使用未调整pH值的超纯水洗脱目的片段。

                    请严格按照操作步骤操作。

                    操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    切取含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶条带。

                    尽量切除不含有目的DNA部分的凝胶,减少凝胶体积,提高DNA回收率。

                        切胶时,请使用长波长UV360 nm)光盒。且不要将DNA长时间暴露在紫外灯下,以防DNA损伤。

                    称取凝胶的重量,近似地确定其体积。

                        凝胶重量的称量方法:取1.5 ml2 ml离心管,用电子天平称初质量,切胶装在离心管后称终质量,两者差即为胶的质量。不同离心管的重量有差异,因此,每个离心管的重量需单独称量。

                    按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 μl溶液BD的比例,向离心管中加入溶液BD。

                    4  50℃水浴7-10min,直至凝胶完全融化。期间需要振荡混合3次。

                        琼脂糖必须完全融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA片段的回收效率。

                        如果总体积大于500 μl,可适当增加溶胶时间。

                    若此时溶液变红,可加10 μl 3M NaAcpH 5.2)。

                    如要从反应液中回收DNA,则向反应液中加入等体积的BD,充分混匀,后续步骤相同:

                    将步骤4所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。

                    胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。

                    若溶液体积大于DNA纯化柱的容积(700 μl),可分两次离心。

                    6  12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                    此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

                    7  加入500 μl溶液BD,12,000 rpm, 离心1min,弃滤液

                    8  加入500 μl溶液PE,12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

                        溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

                        此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量的DNA片段。

                    加入500 μl溶液PE,12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

                    10  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

                        此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

                    11  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 μl溶液Eluent60℃预热),静置2min。

                    12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃。

                       溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

                       对溶液Eluent 65℃预热,会提高提取DNA目的片段的产量。


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