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                    产品中心 > 基因组DNA提纯系列 > 海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒(N1181-N1182)

                    海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒(N1181-N1182)

                    促销: 631.00~1138.00

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                    N1181( 50次) N1182( 100次)

                    海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒

                    产品组分

                     

                    货号

                    N1181

                    50次)

                    N1182

                    100次)

                    消化缓冲液DS

                    15 ml

                    30 ml

                    裂解液MS

                    20 ml

                    40 ml

                    蛋白酶K

                    1 ml

                    2 ml

                    去蛋白液PS

                    30 ml

                    60 ml

                    漂洗液PE

                    15 ml

                    30 ml

                    纯化液TE

                    5 ml

                    10 ml

                    DNA纯化柱

                     50

                     100

                    说明书

                    1

                    1


                    裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

                    漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

                    产品说明

                    本产品可用于海洋动物全血/体液样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于鱼类、虾类、贝类动物全血基因组提取,一次可从20 μl全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNAOD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

                     

                    质量控制

                    纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

                     

                    保存条件

                    蛋白酶K室温运输,于-20保存,避免反复冻融。

                    其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

                    如果消化缓冲液DSMS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

                     

                    注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

                    消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生,在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

                    蛋白酶K请单独保存,不要与裂解液MS混合,如果可能,请在加入蛋白酶K混匀后,稍稍静置再加裂解液MS,可以得到更好的裂解效果。

                    柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

                    基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

                    基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃-80℃。

                    所有离心步骤均为室温进行。

                    请严格按照操作步骤操作。

                    操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    预备实验:

                    取血液/体液样本在红细胞计数板进行细胞计数,计算其细胞数量级10x/ml,(7-xml就是提取基因组DNA所需的血液/体液体积。

                    取血液/体液样本(7-xml加入到一只1.5 ml离心管中,5,000 rpm离心3min,弃上清,收集沉淀。

                       如果样本超过1.5ml,可分次加入,离心收集沉淀,务必使离心所得的沉淀中包含105-106的细胞数。

                    加入200 μl消化缓冲液DS,涡旋振荡直至完全分散。

                        如需去除RNA,加入消化缓冲液DS后,再加入4-15 μl RNase A100 mg/ml,N9042)溶液,振荡混匀,室温放置5min。

                    加入蛋白酶K 20 μl,220 μl裂解液MS,涡旋振荡混匀,65℃温浴10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

                        加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 纯度降低。

                    4  加入220 μl无水乙醇,上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀,将溶液及絮状沉全部转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                    若溶液体积大于DNA纯化柱的容积(700 μl),可分两次离心。

                        此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

                    加入500 μl去蛋白液PS,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                         此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱,以获得高质量的基因组DNA。

                    加入500 μl漂洗液PE,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                         漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

                    加入500 μl漂洗液PE,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                    8  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

                         此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

                    将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl纯化液TE。室温放置2min。

                    10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

                         纯化液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视DNA含量多少、用户对DNA浓度要求而定。

                         对纯化液TE进行65℃预热,会提高基因组DNA的产量。


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