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                    产品中心 > 基因组DNA提纯系列 > 组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒(N1141-N1142)

                    组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒(N1141-N1142)

                    促销: 631.00~1138.00

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                    N1141(50次) N1142(100次)

                    组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)产品组分

                    货号

                    N1141

                    50次)

                    N1142

                    100次)

                    消化缓冲液DS

                    15 ml

                    30 ml

                    裂解液MS

                    20 ml

                    40 ml

                    蛋白酶K

                    1 ml

                    2 ml

                    去蛋白液PS

                    30 ml

                    60 ml

                    漂洗液PE

                    15 ml

                    30 ml

                    纯化液TE

                    5 ml

                    10 ml

                    DNA纯化柱

                     50

                     100

                    说明书

                    1

                    1


                     

                    裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

                    漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

                     

                    产品说明

                    本产品用于多种动物组织(新鲜或冻存)与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料或不超过1×106-107培养细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNAOD260/OD280 = 1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

                     

                    质量控制

                    纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

                     

                    保存条件

                    蛋白酶K室温运输,于-20保存,避免反复冻融。

                    其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

                    如果消化缓冲液DSMS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

                     

                    注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

                    消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生,在55加热溶解,待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

                    应尽量使用新鲜的实验材料,确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-80℃冰箱中保存并避免反复冻融。

                    使用液氮研磨组织材料时,应随时加入液氮,确保提取的基因组DNA不被降解。

                    基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20-80。

                    所有离心步骤均为室温下进行。

                    请严格按照操作步骤操作。

                    操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    [动物组织]

                        取少量样本材料,放入液氮预冷的研钵中,快速用力研磨的同时加入少量液氮,直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中,每管组织材料含量应不超过10 mg。

                        某些匀浆困难,或在匀浆过程中DNA容易降解的特殊组织应加液氮研磨。如DNA酶含量丰富的组织:肝脏、脾脏、胰腺、胸腺、淋巴等;胶原蛋白含量丰富的组织:皮肤、肌腱等;角质蛋白含量丰富或坚硬的组织:骨骼等。

                        如没有液氮,可用剪刀剪成小块,放入研钵或匀浆器中,加入适量TEpH 8.0),处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离心管中,12000 rpm离心1min,弃上清,收集沉淀。

                    每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10μg基因组DNA。样本量过大,将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱,进而降低基因组DNA的得率与纯度。

                    [细胞]

                    贴壁细胞:先用胰酶将贴壁细胞处理成细胞悬液,转移至1.5 ml离心管中,12,000 rpm离心1min,弃上清。

                    悬浮细胞:直接取适量转移至1.5 ml离心管中,12,000 rpm离心1min,弃上清。

                    每只离心管内的细胞量不应超过1×106-107。

                    加入200 μl消化缓冲液DS,漩涡振荡至形成完全均一的悬浮液。

                        如需去除RNA,可加入4 μl RNase A100 mg/ml,N9042),振荡15秒,室温放置5min。

                    3  加入20 μl蛋白酶K,混匀,55℃水浴或金属浴,至组织完全溶解,通常需要1-3小时。对特别难溶解的组织如尾巴、昆虫可放置过夜。

                    4  220 μl裂解液MS,漩涡振荡混匀,65温浴10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

                        加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。       

                    加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠,将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min,弃滤液。

                       若溶液体积大于纯化柱容积(700 μl),可分两次离心。

                    此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

                    加入500 μl去蛋白液PS,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                      此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组DNA。

                    7  加入500μl漂洗液PE,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                      漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

                    加入500 μl漂洗液PE,12,000 rpm离心1min,弃滤液。12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

                        此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

                    将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl洗脱液TE,室温放置2min。

                    10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA,-20保存。

                        洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。

                    对洗脱液TE 65预热,会提高基因组DNA的产量。



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