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                    产品中心 > 基因组DNA提纯系列 > 酵母基因组DNA快速提取试剂盒(N1161-N1162)

                    酵母基因组DNA快速提取试剂盒(N1161-N1162)

                    促销: 722.00~1287.00

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                    N1161(50次) N1162(100次)

                    酵母基因组DNA快速提取试剂盒

                     产品组分

                    货号

                    N1161

                    50次)

                    N1162

                    100次)

                    消化缓冲液DS

                    15 ml

                    30 ml

                    裂解液MS

                    20 ml

                    40 ml

                    蛋白酶K

                    1 ml

                    2 ml

                    去蛋白液PS

                    30 ml

                    60 ml

                    漂洗液PE

                    15 ml

                    30 ml

                    纯化液TE

                    5 ml

                    10 ml

                    DNA纯化柱

                     50

                     100

                    说明书

                    1

                    1

                     

                    裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

                    漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

                    ●本试剂盒需单独购买试剂:溶壁酶(N9031/N9032)。

                    产品说明

                    本产品用于酵母基因组DNA的小量提取。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从1-5×107的酵母细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNAOD260/280 = 1.7-1.9)。

                     

                    质量控制

                    提取的酵母基因组DNA质量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。

                     

                    保存条件

                    蛋白酶K室温运输,于-20℃保存,避免反复冻融。

                    其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

                    如果消化缓冲液DSMS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

                     

                    注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    溶壁酶(N9031/N9032)需要客户另行购买。

                    蛋白酶K请单独保存,不要与裂解液MS混合,如果可能,请在加入蛋白酶K混匀后,稍稍静置再加裂解液MS,可以得到更好的裂解效果。

                    应尽量使用新鲜的菌体,确保提取的基因组DNA不被降解。

                    在操作步骤4中,菌体应充分悬浮,不要残留菌块,避免影响溶菌效果。

                    在操作步骤5中,加入无水乙醇后,可能会出现絮状沉淀,应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中,确?;蜃?/span>DNA的得率。

                    所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm(约13,400×g)。

                    操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

                    向每只1.5 ml离心管中加入酵母细胞液1-5 ml(最多不超过5×107个细胞),12,000 rpm离心1min,尽量去除上清。

                       菌液较多时,可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。

                    向菌体加入600 μl溶壁酶反应缓冲液,200 U溶壁酶,涡旋振匀,30℃消化30min。

                        可根据收集菌体量的不同、菌种的差异,溶壁酶比活的不同,相应调整溶壁酶的用量及消化时间。

                    3  5,000 rpm离心8-10min,去上清,收集沉淀。向收集到的菌体沉淀中加入200 μl消化缓冲液DS,振荡混匀。

                       如需要去除RNA,可加入4 μl RNase A100 mg/ml,N9042)溶液,振荡混匀,室温放置5min。

                    加入20 μl蛋白酶K溶液,55℃水浴或金属浴30min。

                    加入220 μl裂解液MS,涡旋振荡混匀,直至形成均一的悬浮液,65温浴10min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

                       加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明酵母细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。    

                       如菌体超过1.5 ml,可适当延长温浴时间。

                    加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                       若溶液体积大于纯化柱容积(700 μl),可分两次离心。

                    此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

                    如柱子堵塞表明菌体过量。若发生此情况,减少菌量,或适当延长离心时间,直至洗脱液顺利离心至离心管为止。

                    加入500 μl去蛋白液PS,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                      此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组DNA。

                    8  加入500μl漂洗液PE,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

                      漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

                    加入500 μl漂洗液PE,12,000 rpm离心1min,弃滤液。12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

                        此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

                    10  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中,向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl洗脱液TE,室温放置2min。

                    11  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA,-20保存。

                        洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。

                    对洗脱液TE 65预热,会提高基因组DNA的产量。


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