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                    产品中心 > RNA提纯系列 > 细胞/细菌总RNA提取试剂盒(R1061)

                    细胞/细菌总RNA提取试剂盒(R1061)

                    价格: 845.00

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                    R1061(50次)

                    细胞/细菌总RNA提取试剂盒

                    产品组分

                    货号

                    R106150次)

                    溶液RD

                    30 ml

                    溶液RB

                    50 ml

                    溶液RP

                    30 ml

                    溶液RW

                    12 ml

                    TE

                    8 ml

                    DEPC处理水

                    10 ml

                    溶菌酶(50 mg/ml

                    500 μl

                    RNase-free 纯化柱

                    50

                    RNase-free 离心管

                    50

                    说明书

                    1

                    需要自备的溶液

                      β-巯基乙醇

                      无水乙醇

                     

                    产品说明

                    细胞/细菌总RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品,提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度,通过在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA,彻底去除各种蛋白质和其他杂质,从而使得到的RNA纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各种培养细胞或菌体中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处理大量不同的样品,一个小时内即可完成反应。提取的总RNA没有DNA和蛋白的污染,可用于Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、polyA筛选、体外翻译、RNase?;し治龊头肿涌寺〉?。

                     

                    保存条件

                    溶菌酶和DEPC处理水-20℃保存,溶液RD、溶液RB和溶液RP 4℃保存,其他溶液和纯化柱室温保存。

                     

                    注意事项

                      操作前在溶液RD中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%,如1 ml溶液RD中加入10 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的溶液RD 4℃可放置一个月,溶液RD在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。

                      第一次使用前应在溶液RW中加入无水乙醇,加入量为溶液RW:无水乙醇=14,即每12 ml溶液RW需要加入48 ml无水乙醇。

                      严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。

                      使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下(与组织pH值等相关),如果有DNA污染而又必须去除,则可以用RNase-freeDNase处理样品。

                      请严格遵照操作步骤进行操作。

                      不同起始材料用量及预期RNA产率。

                    细胞种类

                    细胞最大用量

                    最大用量时RNA得率

                    COS

                    3×106

                    35 μg

                    Hela

                    7×106

                    15 μg

                    NIH/3T3

                    1×107

                    10 μg


                    操作步骤

                    操作前在溶液RD中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%。

                    第一次使用前应在溶液RW中加入无水乙醇,加入量请参考瓶上标签。

                    1.  收集细胞/菌体

                    悬浮细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107):估计细胞数量,300×g离心5 min,将细胞收集到离心管中,仔细吸除所有培养基上清。

                    单层贴壁细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107):可直接在培养容器中裂解(容器直径不超过10 cm),或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。

                    菌体的收集(收集菌体数最大不超过1×109):4℃ 12,000 rpm离心2 min收集菌体,仔细去除所有培养基上清,用含有溶菌酶的100 μl TE彻底重悬菌体,孵育时间见下表。

                    细菌种类

                    TE缓冲液中溶菌酶的浓度

                    孵育时间(室温)

                    G-细菌

                    400 μg/ml

                    3-5 min

                    G+细菌

                    3 mg/ml

                    5-10 min

                    以下的所有离心步骤均在室温(20-25℃)进行。

                    2.  加入350 μl溶液RD(在使用前请加入β-巯基乙醇),涡旋振荡混匀,若出现不溶性沉淀,12000 rpm离心2 min,将上清转移至另一离心管中。

                    3.  加入700 μl溶液RB,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入纯化柱(纯化柱+收集管)中,12,000 rpm离心30-60 s,倒掉废液,将纯化柱放回收集管中。

                    4.  向纯化柱中加入350 μl溶液RP,12,000 rpm离心30-60 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

                    5.  向纯化柱中加入500 μl溶液RW(使用前请先检查是否已按1:4加入无水乙醇,即含80%乙醇),室温静置2 min,12,000 rpm离心30 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

                    6.  重复上步操作。

                    7.  将纯化柱放回收集管中,12,000 rpm继续空离2 min,去除残余液体,将纯化柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

                     此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。

                    8.  将纯化柱转入一个新的1.5 ml离心管(RNase-free)中,加30–100 μl RNase-free ddH2ODEPC处理水),室温放置2 min,12,000 rpm离心2 min。

                     洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。

                     如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。



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