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                    产品中心 > 荧光定量PCR Mix > HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

                    HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

                    促销: 480.00~28800.00

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                    P2201/1ml P2202/1ml×5 P2203/1ml×10 P2204/1ml×50 P2205/1ml×100

                    HS Probe qPCR Mix

                    Cat. #P2201,P2202,P2203,P2204,P2205

                    产品简介

                    HS Probe qPCR Mix用于探针法实时定量PCR2×浓缩预混液,使用时只需加入模板、引物和探针即可进行反应。本品含有类抗体技术修饰的热启动酶Hotstart Taq DNA聚合酶,配合东盛特制的Real Time PCR Buffer,不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增,而且能够提高扩增效率,可以进行高灵敏度高特异性的PCR反应。本品在宽广的定量域内具有良好的线性关系,对靶基因定量准确、可信度高,重复性好。本品可搭配TaqMan等各类荧光探针使用,与常见定量PCR仪完美兼容,如ABI、Roche、Bio-Rad等。

                    产品组成

                    Component

                    P2201

                    P2202

                    P2203

                    P2204

                    P2205

                    2× HS Probe qPCR Mixa

                    1 ml

                    1 ml×5

                    1 ml×10

                    1 ml×50

                    1 ml×100

                    超纯水

                    1 ml

                    1 ml×5

                    -

                    -

                    -

                    a 包含Hotstart Taq DNA聚合酶,Aptamer,dNTP及反应缓冲液等。

                    保存条件

                    HS Probe qPCR Mix -20℃保存2年,4℃可短期保存。

                    质量控制

                    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                    功能检测:经不同来源的模板和引物检测,产品具有优秀的特异性、灵敏性及可重复性等。

                    应用举例

                    1. 配制反应体系

                    请于冰上配制以下反应体系:

                    Component

                    Volume

                    Final concentration

                    DNA template[1]

                    1-4 μl

                    Variable

                    Forward primer (10 μM)[2]

                    0.4 μl

                    0.2 μM

                    Reverse primer (10 μM)[2]

                    0.4 μl

                    0.2 μM

                    2× HS Probe qPCR Mix

                    10 μl

                    1×

                    Probe (10 μM)[3]

                    Variable

                    0.1-0.5 μM

                    ddH2O

                    Variable

                    -

                    Total volume[4]

                    20 μl

                    -

                    [1] DNA模板建议用量(20 μl体系):1-10 ng cDNA,或10-100 ng gDNA。加样体积不宜过小,以免造成较大的误差,但未稀释的cDNA不宜超过总体积的1/10。因此模板建议浓度(加样前):cDNA 1-10 ng/μl,gDNA 10-100 ng/μl。

                    [2] 引物终浓度建议范围:0.1-1.0 μM, 通常引物终浓度为0.2 μM效果较好。

                    [3] 使用探针的浓度与Real Time PCR扩增仪、探针种类和荧光标记物种类有关,使用时请参照相关说明。通常探针终浓度在0.1-0.5 μM之间。

                    [4] 建议总体积不小于10 μl,以免造成较大的加样误差。具体体积范围参考仪器说明。

                    注意:对于某些固定型号的仪器,需要添加ROX才能精确测定Ct值。由于ROX的使用体积较小,建议将ROX提前与qPCR Mix混匀使用。ROX用量参照具体仪器说明,下表仅供参考。

                    Instruments

                    ROX (100X)

                    ABI PRISM 7000/ PRISM 7700/ 7300/ 7900HT/ Step One/ Step One Plus/ GeneAmp 5700

                    1-2% (High ROX)

                    ABI 7500/ 7500 Fast/ ViiA 7/ QuantStudio 6/7/12K Flex; Agilent Stratagene Mx3000P/ Mx3005P/ Mx4000

                    0.2% (Low ROX)

                    Bio-Rad CFX96/ CFX384/ iQ/ iQ5; MJ Research Opticon 2/ Chromo 4; Roche LightCycler 480/ 96; Corbett Rotor Gene G/ Q/ 3000/ 6000; Thermo PikoReal 96; Eppendorf MasterCycler ep realplex; Cepheid Smart Cycler

                    No ROX

                    2. 设定反应程序进行qPCR反应

                    步法程序示例如下:

                    Stage

                    Temperature

                    Time

                    Cycle

                    Initial denaturation

                    95

                    3 min

                    1

                    Denaturation

                    95

                    10 sec

                    40

                    Annealing & Extension[1]

                    60

                    30 sec

                    [1] 仪器在此阶段进行信号采集,请根据仪器类型设置。如需优化温度,建议在55-65范围内调整。

                    若反应效果不佳,建议采用三步法扩增程序。

                    经典三步法程序示例如下:

                    Stage

                    Temperature

                    Time

                    Cycle

                    Initial denaturation

                    95

                    3 min

                    1

                    Denaturation

                    95

                    10 sec

                    40

                    Annealing[1]

                    60

                    15 sec

                    Extension

                    72

                    20 sec

                    [1]  仪器在此阶段进行信号采集。常用退火温度在55-65℃之间。退火温度一般设定为所用引物的Tm-5℃,若低于55℃,则以Tm值为退火温度,一般不低于55℃。请根据仪器类型设置反应时间。

                    3. 分析结果

                    观察扩增曲线;调整基线,计算Ct值;进行相对或绝对定量。

                    注意事项

                    ? 使用前Mix需要完全解冻,充分混匀。尽量避免多次反复冻融。短期使用可保存于4℃。

                    ? 将(n+x)份反应液混匀后再分注到n个单管中,可降低加样误差。(n为重复次数,x为损耗量,一般为n1/10

                    ? ABI的定量仪器大部分需要ROX校正管间差异,Bio-Rad的定量仪器不需要ROX校正。具体仪器请参照其使用说明。

                    ? 轻轻混匀反应液,避免产生气泡,气泡会干扰荧光检测??伤彩崩胄娜コ?。

                     引物的特异性、用量以及退火温度是影响实验结果的重要因素。务必设计特异性好的引物,随实验结果适当调整引物用量(0.1 μM-1.0 μM——特异性较差时减少引物用量,或以3℃为增量提高退火温度,扩增效率较低时增加引物用量。

                    ? DNA模板的量应小于500 ng/反应,过高的模板量会引起非特异性扩增。应根据模板类型与基因表达量适当调整用量。

                    ? 各类探针应参照相应的指南进行设计,并根据所用扩增仪类型、探针种类和荧光标记物种类等调整用量。

                     

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                    名称

                    货号

                    规格

                    PCR Mix

                    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    Power Green qPCR Mix

                    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

                    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                    1kb ladder

                    M1181/M1182

                    50/250

                    DSTM5000

                    M1111/M1112

                    60/300

                    高纯度质粒小提试剂盒

                    N1011/N1012/N1013

                    50/100/200

                    通用RNA提取试剂盒

                    R1051

                    50

                    基因组DNA快速提取试剂盒

                    N1111/N1112

                    50/100

                    DNA凝胶回收试剂盒

                    N1071/N1072/N1073

                    50/100/200

                    RT-PCR Kit

                    R1011/R1012

                    20/100

                    更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

                     


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