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                    通用菌落PCR检测试剂盒(P8011-P8012)

                    促销: 143.00~1053.00

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                    P8011(50次) P8012(500次)

                    通用菌落PCR检测试剂盒

                    Cat. #P8011,P8012

                    产品简介

                    本试剂盒利用PCR原理,结合本公司的快速DNA聚合酶(延伸速率20s/kb),设计适用性广的最佳引物,优化PCR反应缓冲体系,同时简化检测方法,可用于各种常用T载体克隆的筛选检测。

                     

                    产品组成

                    Component

                    P8011

                    P8012

                    2× FSTM Mix

                    500 μl

                    1 ml × 5

                    T-primer (10 μM)

                    50 μl

                    500 μl

                    超纯水

                    1 ml

                    1 ml × 10

                    说明书

                    1

                    1

                     

                    活性定义

                    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

                     

                    保存条件

                    -20℃保存。

                     

                    质量控制

                    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                    功能检测:PCR方法检测本试剂盒无宿主残余DNA,也无其他DNA污染,能有效完成PCR扩增。

                     

                    应用举例

                    1. 准备样品

                    将过夜培养的平板上的菌落编号后,用灭菌的牙签挑取单克隆菌体的一部分至反应体系中;或在1.5 ml EP管中分装500 μl含有相应抗生素的LB培养基,并做好标记,用无菌牙签提取单个菌落至上述培养基中,37振荡(250-300rpm)培养4h,取1-2 μl菌液用于扩增。

                    2. 配制反应体系

                    请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

                    Ordinal

                    Component

                    Volume

                    (20 μl reaction volume)

                    1

                    2× FSTM   Mix

                    10   μl

                    2

                    T-primer (10 μM)*

                    1 μl

                    3

                    菌体或菌液

                    1 μl

                    4

                    超纯水

                    To   20 μl

                    *包含了上下游引物,扩增大小约为:克隆片段+250 bp。

                    加入各组分后,请用枪头反复吸吹几次,充分混匀。

                    在一次配制多管需分装时建议按(n+1)的反应液量配制,以确保分配时的耗损不会影响实验,同时选择大于总体积的离心管便于混匀。

                    如需使用其他体积的PCR反应体系,请按各组分比例缩减或增加各组分用量。

                    将混匀的各管短暂离心,置于PCR仪中。

                     

                    3. 设定反应程序进行PCR反应

                    Stage  

                    Temperature

                    Time

                    Number   of Cycles

                    Initial   Denaturation

                    94℃

                    3   min

                    1

                    Denaturation

                    94℃

                    30   sec

                    30

                    Annealing

                    55℃

                    30   sec

                    Extension

                    72℃

                    30   sec or 45 sec

                    Final   Extension

                    72℃

                    5   min

                    1

                    设定PCR程序时,请根据目的片段大小决定延伸时间,如果目的片段大小为500 bp时,延伸时间为15 sec;500 bp-1 kb,延伸时间20 sec;目的片段>1 kb时,延伸时间按20s/kb计算。

                     

                    3. 分析结果

                    反应结束后取2-5 μl反应产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。

                     

                    注意事项

                    请严格按照说明书提供的实验体系及实验条件进行试验。

                    室温下DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加FSTM Mix或模板DNA。

                    挑取菌落时,应选择单菌落,不要挑取太多菌体,以免影响PCR结果。

                    部分适用T载体参考下表:

                    公司

                    T载体

                    Promega

                    pGEM-T   Vector

                    pGEM-T   Easy Vector

                    Takara

                    pMD18-T   Vector

                    pMD19-T   Vector

                    pMD20-T   Vector

                    pMD18-T   Simple Vector

                    pMD19-T   Simple Vector

                    pSIMPLE-18   EcoR V/BAP Vector

                    pSIMPLE-19   EcoR V/BAP Vector

                    Tiangen

                    pGM-T载体

                    pBS-T载体

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